查士丁尼王朝(518~610)，東羅馬帝國的第三個王朝，由查斯丁一世(又譯查士丁一世)開創，因查士丁尼一世而得名，終結於福卡斯，共計有6個皇帝，統治92年。 另說將最後一位君主福卡斯單列爲"福卡斯王朝"的君主，則查士丁尼王朝計有五帝，統治84年。
自查士丁一世起，所有查士丁尼王朝皇帝均沒有子嗣，故帝位並非在直系血親間傳承。
查斯丁一世出身行伍，據說目不識丁(據普羅科比記載，其擔任皇帝期間由於不會簽名，需要藉助於"圖章")，依靠戰功及忠誠升任阿納斯塔修斯一世的近衛軍隊長(普羅科比《戰記》一書中有關於其參加波斯戰爭的記錄)。因此在阿納斯塔修斯身後的政治角逐中舉足輕重，在查士丁尼建議下用策利用形勢登上皇帝寶座(登基時六十八歲)。此後任命外甥爲凱撒、共治皇帝，並最終傳位於外甥。
鼎盛期
6世紀時，東羅馬的主要敵人是它的傳統老敵人:波斯人(薩珊王朝)、斯拉夫人和保加爾人。神學的爭論，比如對基督一性論的爭論，也是帝國的重要話題。但東部帝國並沒有忘記它在西部的根。在查士丁尼一世和他傑出的將軍貝利薩留的領導下，東羅馬帝國甚至奪回了它部分在西部喪失的省份:意大利的大部份地區、北非和西班牙。具體包括亞平寧半島、利比亞、突尼斯、今阿特拉斯山脈以北的阿爾及利亞和今天摩洛哥的丹吉爾和伊比利亞半島最南端。
查士丁尼重編了古羅馬的法規，制定了《民法大全》。值得注意的是:這部法典是用拉丁語寫的，而當時拉丁語已被認爲是一種古老的語言了，甚至許多寫這部法典的人都不太會說這種語言。
530年代，在查士丁尼的統治下，聖索非亞大教堂(其原名Hagia Sophia是希臘語"神聖智慧"之意)開始動工。這座教堂後來成爲拜占庭宗教生活和東正教的中心。
衰落期
查士丁尼一世在位時，王朝勢力達到頂峯，但是很快就衰落。
查士丁尼一世給他的繼承人留下了一個空空的國庫，而他的繼承人也無法對付所有邊境上突然出現的新敵人。在查士丁尼時代，最早的斯人(542年)、阿瓦爾人(557年)就已經穿越了多瑙河。由於帝國的重兵集結在東部邊境，以對抗依蘭沙赫爾，因此他們得以從帝國的西北部趁虛而入。斯拉夫人打垮了駐紮在伊斯特拉半島上的帝國軍隊，並奪取了亞得里亞海沿岸的所有主要城市，摧毀了多瑙河以南的帝國防務體系。此時西班牙和意大利也面臨着蠻族起義的威脅。伊比利亞半島上的君主制國-西哥特人(418-711年)對帝國屬地發動全面進攻，將羅馬的力量逐出伊比利亞半島，東哥特人隨即在意大利發動叛亂，倫巴底人於568年入侵亞平寧半島並建立了倫巴第王國，只給帝國留下亞平寧半島南端的一部分，以及拉文納與羅馬之間一塊不安全的地區。
禍不單行的是，幾場猛烈的瘟疫也襲擊了東羅馬的領土。公元541年，鼠疫開始在東羅馬帝國屬地中的埃及爆發，接着便迅速傳播到了首都君士坦丁堡及其它地區。
當時出現了許多詭異恐怖的情景:當人們正在相互交談時，便不能自主地開始搖晃,然後就倒在地上;人們買東西時，站在那兒談話或者數零錢時，死亡也會不期而至。而最早感染鼠疫的是那些睡在大街上的貧苦人，鼠疫最嚴重的時候，一天就有5000到7000人，甚至上萬人不幸死去。
官員在極度恐懼中不得不向查士丁尼彙報，死亡人數很快突破了23萬人，已經找不到足夠的埋葬地，屍體不得不被堆在街上，整個城市散發着屍臭味。查士丁尼自己也險些感染瘟疫，在恐懼之中，他下令修建很多巨大的能夠埋葬上萬具屍體的大墓，並以重金招募工人來挖坑掩埋死者，以阻斷瘟疫的進一步擴散。於是，大量的屍體不論男女、貴賤和長幼，覆壓了近百層埋葬在了一起。鼠疫使君士坦丁堡40%的城市的居民死亡。它還繼續肆虐了半個世紀，直到1/4的羅馬人口死於鼠疫。這次鼠疫引起的饑荒和內亂，徹底粉碎了查士丁尼的雄心，也使東羅馬帝國元氣大傷，走向崩潰。
王朝滅亡
末期的王朝先後經歷了莫里斯(582-602)和福卡斯(602-620)的統治。由於外敵入侵和內部紛爭，帝國從極端無能的狀態進入完全無政府主義的時代。最後，查士丁尼王朝終於被希拉剋略王朝取代。
