1941年4月6日，德軍實施"第25號計劃"，1941年4月17日，南斯拉夫王國政府代表在投降書上簽字。經過短短的10天，南斯拉夫作爲統一的主權國家已不復存在，成爲淪陷於法西斯的第12個歐洲國家。鐵托領導南共和人民進行反法西斯鬥爭，爲武裝起義作準備。4月底，他召開南共中央委員會會議，在會上作關於全國形勢的詳細報告。會議提出反對侵略者的起義問題，確立了民族解放陣線的基礎。
1941年6月22日，德國突襲蘇聯，德軍取得了蘇德戰爭初期的巨大 勝利。歐洲的其餘部分，除了英國，都在希特勒的控制之下，歐洲成了希特勒的歐洲。在這第二次世界大戰最危急的時刻，南斯拉夫的起義爆發了。南斯拉夫人民在以鐵托爲首的南共領導下與法西斯作鬥爭。1941年6月27日，南共中央成立南斯拉夫人民遊擊司令部，鐵托任總司令。此後幾個月內，遊擊司令部所統率的部隊已達8萬，開闢了一系列敵後根據地。1941年9月18日，鐵托從首都貝爾格萊德平安進入解放區，成爲南斯拉夫人民反法西斯戰場上的軍事統帥。不久，游擊隊攻佔烏日策城，建立了象徵性的烏日策共和國。
爲了壯大反法西斯的力量，鐵托積極爭取另一支具有抵抗思想的隊伍--前南斯拉夫軍德拉查·米哈依治維奇上校領導的切特尼克(意爲軍隊)。鐵托先後兩次(1941年9月19日，1941年10月27日)親自去切特尼克控制的地區與米哈依洛維奇會晤，提出雙方聯合作戰、設立聯合作戰參謀部等建議。鐵托與米哈依洛維奇會晤後不久，德軍開始進攻烏日策，飛機、坦克、步兵協同作戰，互相配合。雙方力量對比懸殊，游擊隊雖經抵抗，但最後不得不撤出烏日策。
1941年12月，鐵托組建了第1無產者旅，其後，另外4個無產者旅也相繼成立。這是一種以隊員的高度紀律性和作戰的特殊方式而著稱的游擊隊組織。他們作爲突擊部隊，不受地區的限制，可以調往任何戰線，是南斯拉夫人民武裝的中堅力量。
1942年，德軍進攻解放區，南斯拉夫人民反抗法西斯的鬥爭進入最困難時期。鐵托率領游擊隊在無任何外援的情況下孤軍奮戰，進行了南斯拉夫游擊隊的"長征"，向北長途行軍200英里而到達波斯尼亞西部解放區，連續打退敵人的多次進攻，擺脫了絕境。在6月份的蘇捷斯卡戰役中，鐵托一行遭到德機轟炸，只是由於他的愛犬盧克斯捨身相救，鐵托才死裏逃生，僅負輕傷。
1943年，世界軍事形勢發生了巨大變化，蘇軍在東線轉入進攻，盟國已把隆美爾趕出北非，意大利法西斯被迫無條件投降，德國法西斯的最後失敗已成定局。1943年11月29日被定爲南斯拉夫的國慶日。會議通過決議剝奪了倫敦流亡政府作爲南斯拉夫政府所擁有的權力，鐵托被授予南斯拉夫元帥軍銜，並當選爲南斯拉夫人民委員會(即臨時政府)主席和國防人民委員。
1944年夏，南斯拉夫人民解放軍發展壯大，幾戰皆捷。德軍司令部不甘失敗，準備襲擊駐在德瓦爾城的南斯拉夫人民解放軍和游擊隊最高統帥部，企圖使南斯拉夫反法西斯武裝力量陷於羣龍無首的境地。“跳馬”計劃定於鐵托的生日(5月25日)實施，主力是由500名犯了軍法的黨衛軍人員組成的空降營。這些人獲准參與這次特別危險的戰鬥以立功贖罪，每人發有一張鐵托的照片，奉令儘可能活捉他。
1944年5月25日清晨，德國空軍轟炸機羣和戰鬥機羣飛抵德瓦爾城，對毫無準備的整個城市和市郊進行狂轟濫炸。德國人僅繳獲了鐵托的一套新制服和一雙長統靴。作爲英國聯絡官而降落在解放區的英國丘吉爾首相之子倫道夫·丘吉爾也安然脫險。
